Valentina P. Boschini1; Estefania Peri Ibañez2; Alejandro A. Castello2, 3; Pamela L. Kikot1; Constanza Y. Flores1, 3; Mariano Graselli1
1 Laboratorio de Materiales Biotecnológicos, Departamento de Ciencia y Tecnología, Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, B1876BXD, Argentina.
2 Laboratorio de Inmunología y Virología, Departamento de CyT, Universidad Nacional de Quilmes, Bernal, B1876BXD, Argentina.
3 Instituto de Ciencias de la Salud, UNAJ- Hospital de Alta Complejidad en Red El Cruce- Centro de Medicina Traslacional (CeMeT); Florencio Varela, Argentina
Mié 3/6 · 17:00–19:00
Sesión de pósters 1
Los nanosensores basados en nanomateriales permiten detectar analitos con alta sensibilidad y especificidad gracias a su elevada relación superficie/volumen y a propiedades ópticas que dependen del tamaño de las partículas. Dentro de estos sistemas, las nanopartículas de oro se destacan por su estabilidad coloidal, su síntesis sencilla y reproducible, su biocompatibilidad y sus propiedades ópticas asociadas a la resonancia de plasmón superficial localizado. Estas características han favorecido su aplicación en biosensores colorimétricos y en dispositivos de diagnóstico rápido tipo Point-of-Care, como los ensayos de flujo lateral , que hoy constituyen una de las plataformas más utilizadas para diagnóstico descentralizado.
En este trabajo se planteó como hipótesis que el recubrimiento de AuNPs con una proteína A recombinante (denominada AviPure) permitiría orientar anticuerpos IgG anti-rotavirus A (RVA) a través de su unión específica a la región Fc, dejando expuestos los dominios Fab y mejorando así el desempeño analítico del IFCL, al mismo tiempo que se reduciría la cantidad de anticuerpo necesaria. El objetivo general fue diseñar y optimizar un NS basado en AuNPs/AviPure/IgG para la detección de RVA.
Las AuNPs se sintetizaron siguiendo el método de Frens, obteniéndose partículas monodispersas de aproximadamente 23 nm, con un máximo de LSPR a 520 nm. La optimización del nanosistema mostró que el uso de buffer Fosfato 100 mM pH 9 y una concentración de 0,75 mg/ml de AviPure (relación AuNPs/AviPure 1:10) brindaron la mayor estabilidad coloidal. El sistema se mantuvo estable frente a alta fuerza iónica, en presencia de agentes reductores como TCEP y DTT, y durante al menos 14 días de almacenamiento, sin evidencias de agregación significativa. La incorporación de IgG (0,1 mg/ml) no comprometió la estabilidad del nanosistema y permitió reducir diez veces la cantidad de anticuerpo en comparación con la adsorción directa sobre AuNPs. En los ensayos funcionales, el nanosistema AuNPs/AviPure/IgG reconoció RVA en ensayos de Dot Blot y mostró mayor intensidad de señal en tiras IFCL respecto al sistema AuNPs/IgG, aunque se detectaron interacciones inespecíficas que deberán optimizarse en etapas posteriores.
En conjunto, se logró desarrollar un NS estable y funcional que respalda la estrategia de orientación controlada de anticuerpos mediante AviPure como una herramienta prometedora para mejorar el rendimiento analítico en dispositivos de diagnóstico rápido.